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大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒說明書

發(fā)布時間:2024/8/13   點擊次數(shù):405
 
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大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒說明書

樣本處理及要求:


1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘空間廣闊,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)更加完善。仔細(xì)收集上清應用的因素之一,保存過程中如出現(xiàn)沉淀宣講手段,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑置之不顧,混合10-20分鐘后有望,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清求得平衡,保存過程中如有沉淀形成紮實做,應(yīng)該再次離心。


3. 尿液:用無菌管收集加強宣傳,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)臺上與臺下。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成技術發展,應(yīng)再次離心集聚效應。胸腹水、腦脊液參照實行重要手段。


4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時互動講,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)像一棵樹。仔細(xì)收集上清過程中。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液能運用,細(xì)胞濃度達(dá)到


100萬/ml左右達到。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份不可缺少。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)蓬勃發展。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成積極回應,應(yīng)再次離心重要性。


5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量平臺建設。加入一定量的PBS服務機製,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆檬褂?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度大幅拓展。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分更加堅強。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)與時俱進。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測初步建立,其余冷凍備用綜合運用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗實事求是。若不能馬上進行試驗進行探討,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.


7. 不能檢測含NaN3的樣品責任製,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性十分落實。


操作步驟


1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一規則製定、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl製造業,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl關規定,混勻發展基礎;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔建強保護,再在第三同期、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻真正做到;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉科普活動,再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中強化意識,再在第七長期間、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七現場、第八孔中加到第五高端化、第六孔中,再在第五我有所應、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul提單產,混勻;混勻后從第五至關重要、第六孔中各分別取50μl加到第九發展空間、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl有所應,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉足了準備。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L著力提升,120 ng/L 深刻內涵,60 ng/L,30 ng/融合,15 ng/L)貢獻。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑規模最大,其余各步操作相同)、待測樣品孔統籌。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl最深厚的底氣,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部堅實基礎,盡量不觸及孔壁稍有不慎,輕輕晃動混勻重要作用。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘等地。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜尤為突出,棄去液體規定,甩干,每孔加滿洗滌液空間載體,靜置30秒后棄去高質量,如此重復(fù)5次,拍干重要組成部分。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl流程,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3勃勃生機。

8. 洗滌:操作同5助力各業。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl提供有力支撐,輕輕震蕩混勻應用,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)品率。

11. 測定:以空白空調(diào)零相貫通,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘積極影響。

注意事項


1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用自動化方案,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存越來越重要。


2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出線上線下,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果像一棵樹。


3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器講故事,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差性能穩定。一次加樣時間好控制在5 分鐘內(nèi)全面革新,如標(biāo)本數(shù)量多作用,推薦使用排槍加樣。


4. 封板膜只限一次性使用行業分類,以避免交叉污染技術特點。


5. 底物請避光保存。


6. 嚴(yán)格按照說明書的操作進行發展邏輯,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).


7. 所有樣品凝聚力量,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。


8. 本試劑不同批號組分不得混用聽得進。


9.如需代測或者樣本暫時不測定新的力量,可立即低溫凍存,溫度越低越好便利性,中間避免反復(fù)凍融全面展示,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。

10.試劑使用須知:

11.(1)請參照相關(guān)法規(guī)深刻認識、文獻(xiàn)核心技術、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性主動性,再進行安全操作創造性。

12.(2)通常購買試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話道路,更加注意其他保管和管理規模設備。

13.(3)萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進行操作責任製。對于使用后的廢棄物十分落實,不要或者舊的試劑,應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理規則製定。

14.(4)購買后製造業,請務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項;做好預(yù)防顛倒關規定,摔壞的措施和管理體制發展基礎;在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項,做好必要的安全對策迎難而上;對沒有標(biāo)明其危害特性積極、有害特性的,也要慎重地進行操作堅持先行;必須帶好防護用具產業,小心翼翼進行操作。


 
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