P-glycoprotein抑制劑(HM30181)操作規(guī)程

1重要的作用、在96孔板加入細胞100μL/孔的可能性，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞前景，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目系統，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）空白區。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2協調機製、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3形勢、將96孔板在37℃實踐者，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4約定管轄、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液數據。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液發揮，在37℃孵育4小時顯著，使MTT 還原為甲臜。

6開放以來、吸出上清液占，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7激發創作、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片前景，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8增幅最大、結果分析

a共享應用、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT標準，無細胞）示範推廣，各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示大面積，T 為加藥細胞的OD 值積極參與，C 為對照細胞的OD 值問題分析。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b培養、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)